Hollandiyalı tədqiqatçılar CRISPR və bioluminescence-ni eksperimental testdə birləşdiriryoluxucu xəstəliklər

Hollandiyalı tədqiqatçıların fikrincə, yeni hazırlanmış gecə zülalı virus xəstəliklərinin diaqnozunu sürətləndirə və sadələşdirə bilər.
Çərşənbə günü ACS Nəşrlərində dərc olunan onların araşdırması parlaq mavi və ya yaşıl zülallardan istifadə edərək viral nuklein turşularını və onların görünüşünü sürətlə təhlil etmək üçün həssas, bir addımlı metodu təsvir edir.
Patogenlərin nuklein turşusu barmaq izlərini aşkar etməklə müəyyən edilməsi klinik diaqnostika, biotibbi tədqiqatlar və qida və ətraf mühitin təhlükəsizliyi monitorinqində əsas strategiyadır.Geniş istifadə olunan kəmiyyət polimeraza zəncirvari reaksiya (PZR) testləri yüksək həssaslığa malikdir, lakin mürəkkəb nümunənin hazırlanması və ya nəticələrin təfsiri tələb olunur, bu da bəzi səhiyyə parametrləri və ya məhdud resurs parametrləri üçün onları qeyri-mümkün edir.
Hollandiyadan olan bu qrup müxtəlif şəraitlərdə tətbiq oluna bilən sürətli, daşınan və istifadəsi asan nuklein turşusu diaqnostikası metodunu hazırlamaq üçün universitetlər və xəstəxanalar alimləri arasında əməkdaşlığın nəticəsidir.
Onlar odböcəyi parıltılarından, atəşböcəyi parıltılarından və su fitoplanktonunun kiçik ulduzlarından ilhamlanmışdılar, bunların hamısı biolüminesans adlı bir fenomendən qaynaqlanır.Bu qaranlıqda parıltı effekti lusiferaza zülalının iştirak etdiyi kimyəvi reaksiya nəticəsində yaranır.Alimlər hədəf tapdıqda müşahidəni asanlaşdırmaq üçün işıq yayan sensorlara lusiferaza zülallarını daxil ediblər.Bu, bu sensorları qayğı nöqtəsinin aşkarlanması üçün ideal etsə də, hazırda klinik diaqnostik testlər üçün lazım olan yüksək həssaslığa malik deyil.CRISPR gen redaktə üsulu bu qabiliyyəti təmin edə bilsə də, mürəkkəb, səs-küylü nümunələrdə mövcud ola biləcək zəif siqnalı aşkar etmək üçün bir çox addımlar və əlavə xüsusi avadanlıq tələb edir.
Tədqiqatçılar CRISPR ilə əlaqəli zülalı sadə rəqəmsal kamera ilə aşkarlana bilən bioluminessensiya siqnalı ilə birləşdirməyin yolunu tapıblar.Təhlil üçün kifayət qədər RNT və ya DNT nümunəsinin olduğundan əmin olmaq üçün tədqiqatçılar təxminən 100°F sabit temperaturda işləyən sadə bir texnika olan rekombinaz polimeraz gücləndirilməsini (RPA) həyata keçirdilər.Onlar Luminescent Nuklein Acid Sensor (LUNAS) adlı yeni platforma hazırlayıblar ki, burada iki CRISPR/Cas9 zülalları viral genomun müxtəlif bitişik hissələri üçün səciyyəvidir, hər birində yuxarıda onlara əlavə olunmuş unikal lusiferaza fraqmenti var.
Tədqiqatçıların tədqiq etdiyi xüsusi virus genomu mövcud olduqda, iki CRISPR/Cas9 zülalı hədəf nuklein turşusu ardıcıllığına bağlanır;onlar bütöv lusiferaza zülalının əmələ gəlməsinə və kimyəvi substratın mövcudluğunda mavi işıq saçmasına imkan verən yaxınlıqda olurlar..Bu prosesdə istehlak edilən substratı hesablamaq üçün tədqiqatçılar yaşıl işıq yayan nəzarət reaksiyasından istifadə etdilər.Rəngini yaşıldan maviyə dəyişən bir boru müsbət nəticəni göstərir.
Tədqiqatçılar aşkar edən RPA-LUNAS analizini inkişaf etdirərək platformalarını sınaqdan keçirdilərSARS-CoV-2 RNTyorucu RNT izolyasiyası olmadan və nazofarengeal tampon nümunələrində diaqnostik performansını nümayiş etdirdi.COVID-19xəstələr.RPA-LUNAS SARS-CoV-2-ni 200 nüsxə/μL qədər RNT virus yükü olan nümunələrdə 20 dəqiqə ərzində uğurla aşkar edib.
Tədqiqatçılar onların analizinin bir çox digər virusları asanlıqla və effektiv şəkildə aşkarlaya biləcəyinə inanırlar."RPA-LUNAS, yoluxucu xəstəliklərin müayinəsi üçün cəlbedicidir" dedilər.